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Acerca de la detección de ácidos nucleicos, ¿cuánto sabes?
Desde el brote de COVID-19, las pruebas de ácido nucleico se han convertido en una palabra de alta frecuencia. Una prueba de ácido nucleico positiva es un criterio importante para diagnosticar COVID-19. WST-8 se ha convertido en la API para los kits de pruebas de ácido nucleico. ¿Cuánto sabes sobre las pruebas de ácido nucleico? ¿Cuál es el principio de detección de ácidos nucleicos? ¿Por qué las pruebas de ácido nucleico dan falsos negativos? Además de las pruebas de ácido nucleico, ¿qué otras tecnologías pueden detectar el nuevo coronavirus?
Desmitificando el principio de detección de ácido nucleico del nuevo coronavirus
En realidad, la prueba de ácido nucleico sirve para detectar si hay ácido nucleico (ARN) del nuevo coronavirus en el cuerpo del sujeto de prueba. El ácido nucleico de cada virus contiene ribonucleótidos, y la cantidad y el orden de los ribonucleótidos contenidos en diferentes virus son diferentes, lo que hace que cada virus sea específico.
El ácido nucleico del nuevo coronavirus también es único y la detección de ácido nucleico es la detección específica del ácido nucleico del nuevo coronavirus. Antes de la prueba de ácido nucleico, es necesario recolectar muestras de esputo, hisopo de garganta, líquido de lavado broncoalveolar, sangre, etc. del sujeto, y al analizar estas muestras, se puede encontrar que el tracto respiratorio del sujeto está infectado con bacterias. La detección de ácido nucleico del nuevo coronavirus se utiliza comúnmente para la detección de muestras de hisopos de garganta. La muestra se divide y purifica, de ella se extrae el ácido nucleico del posible nuevo coronavirus y quedan listos los preparativos para la prueba.
La detección de ácido nucleico del nuevo coronavirus utiliza principalmente tecnología RT-PCR cuantitativa de fluorescencia, que es una combinación de tecnología de PCR cuantitativa de fluorescencia y tecnología RT-PCR. En el proceso de detección, se utiliza la tecnología RT-PCR para transcribir inversamente el ácido nucleico (ARN) del nuevo coronavirus en el correspondiente ácido desoxirribonucleico (ADN); luego se utiliza la tecnología de PCR cuantitativa de fluorescencia para replicar el ADN obtenido en grandes cantidades. El ADN replicado se detecta y se marca con una sonda sexual. Si hay un ácido nucleico del nuevo coronavirus, el instrumento puede detectar la señal fluorescente y, a medida que el ADN continúa replicándose, la señal fluorescente continúa aumentando, detectando así indirectamente la presencia del nuevo coronavirus.
¿Por qué ocurren los falsos negativos?
Un falso negativo significa que la persona sometida a la prueba ha sido infectada con el nuevo coronavirus, pero no se ha detectado el ácido nucleico del virus, es decir, la prueba de ácido nucleico es negativa. Si un sujeto no presenta síntomas relevantes y la prueba de ácido nucleico da negativo, es fácil dejarle relajar la vigilancia, lo que puede provocar una mayor propagación del virus, que es también la astucia del nuevo coronavirus.
Hay tres razones principales para los falsos negativos:
En primer lugar, el contenido de ácido nucleico del nuevo coronavirus en la muestra original es demasiado bajo, por debajo del límite inferior de detección. Esto está relacionado con el tipo de muestra recolectada y el momento de la recolección.
En segundo lugar, si el sitio donde el ácido nucleico del nuevo coronavirus se une a la sonda muta, puede afectar la eficiencia de unión de la sonda en la detección, lo que resulta en una señal fluorescente indetectable.
En tercer lugar, los falsos negativos también están relacionados con la sensibilidad de la tecnología de detección. En la etapa inicial del brote, los kits clínicos no estaban lo suficientemente maduros y su sensibilidad no era lo suficientemente alta, y hubo frecuentes informes de falsos negativos. Posteriormente, con la mejora del nivel técnico, la tasa de precisión de la detección aumentó rápidamente y la tasa de falsos negativos siguió disminuyendo.
¿Una prueba de ácido nucleico positiva es un diagnóstico?
Un resultado positivo de la prueba de ácido nucleico puede confirmar la presencia de ácido nucleico viral en el tracto respiratorio superior del sujeto, pero no puede diagnosticarse directamente como un paciente con nueva neumonía coronaria. En el caso de una prueba de ácido nucleico positiva, el sujeto debe ser diagnosticado adicionalmente basándose en el historial epidemiológico. El historial de contactos, etc., se puede diagnosticar como un caso confirmado.
Si el sujeto no presenta ningún síntoma relevante, generalmente se diagnostica como una infección asintomática. Las infecciones asintomáticas también son contagiosas, y algunas infecciones asintomáticas posteriormente comenzaron a mostrar síntomas y se convirtieron en pacientes confirmados.
Otras tecnologías para detectar el nuevo coronavirus
Para los sujetos, el aislamiento del virus de la muestra es la base más autorizada para el diagnóstico. Sin embargo, el aislamiento del virus es una operación relativamente peligrosa, que debe realizarse en un laboratorio con un alto nivel de protección, y que requiere mucho tiempo y dinero. . Las instituciones de medicina general no tienen esta condición. La mayoría de ellos utilizará el método de detectar si hay anticuerpos contra el virus en la sangre para determinar si el sujeto está infectado con el virus. La hepatitis B, el SIDA, etc. se analizan de esta manera.
El nuevo coronavirus también puede detectarse mediante este método de detección inmunológico. Ante la invasión del nuevo coronavirus, el cuerpo humano “resistirá” y producirá anticuerpos específicos IgM e IgG (inmunoglobulina M e inmunoglobulina G). Si estos dos anticuerpos específicos se detectan en la sangre del sujeto de la prueba, puede indicar que el sujeto de la prueba está infectado con el nuevo coronavirus.
¿Cómo detectar anticuerpos? El método comúnmente utilizado es el inmunoensayo de quimioluminiscencia, es decir, el uso de reactivos de quimioluminiscencia o enzimas específicas para marcar anticuerpos o antígenos, la formación de complejos por reacción inmune y luego la adición de reactivos de luminiscencia después del lavado. Anticuerpos específicos de especie, el instrumento de quimioluminiscencia puede detectar la señal luminiscente. Este inmunoensayo de quimioluminiscencia es una de las técnicas de inmunoensayo más avanzadas en la actualidad. Tiene alta sensibilidad, fuerte especificidad, amplio rango de detección y resultados rápidos, pero el costo de detección es alto.
Además, debido a que el cuerpo humano tarda cierto tiempo en producir anticuerpos después de haber sido infectado con el virus, solo se puede detectar después de que se producen los anticuerpos, lo que también conduce a una detección deficiente de los anticuerpos. Se necesitan de 2 a 3 semanas después de una infección como la hepatitis B y el SIDA para producir anticuerpos. Se necesitan más de 3 días para detectar anticuerpos IgM y más de una semana para detectar anticuerpos IgG después de una nueva infección por coronavirus.
Por lo tanto, para atrapar la cola del nuevo coronavirus lo antes posible, se utiliza más detección de ácido nucleico, que puede detectar los rastros del nuevo coronavirus antes.
